Update: ANA Testing 2015

2015年抗核抗体（ANA）检测方面的最新资讯

演讲者: University of Washington  Mark Wener

ACR Choosing Wisely指南建议，除非抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）阳性，否则不应检测ANA亚群。但讲者表示，包括其在内的很多人都违反这条建议。调查显示，约3200万（占年龄≥12岁的人群的13.8%）美国人为ANA阳性。

2009年2月，ACR发表有关ANA检测的立场声明，表示应持续以基于显微镜的ANA-免疫荧光检测（IFA）作为ANA检测的金标准。

目前的ANA筛查方法包括免疫荧光显微术、ELISA和使用率日益增加的多重检测法[微珠检测/可寻址激光微珠检测（讲者称之为‘流式微珠检测’）]。

IFA-ANA可检测什么ANA亚群？理论上，可检测几乎所有亚群，包括dsDNA、SSA、SSB、Sm、RNP、核仁、着丝粒和组蛋白等等。

多重检测法是基于多重荧光微球（微珠）的流式细胞免疫分析法。使用多重抗原微珠可在1次反应中检测多种抗体。

多重检测法在大型实验室占主导，因为这种方法为自动分析法、检测费用低廉、可从1个样本获得多个结果、不同的生产商具有相似的设计（但不相同）、可用于报告个体自身抗体结果，并且一些实验室也使用这种方法代替IFA-ANA（违反Choosing Wisely指南）。

那什么是正确的ANA检测方法呢？这取决于谁是提问和回答问题的人。IFA是ANA筛查的‘参考方法’。但也可使用其他检测方法。对于风湿病医生而言，方法要具有敏感性（不要漏诊，预检测的概率高）。从大部分临床实验室主任的角度来看，并没有ANA金标准检测方法。ANA检测是标准化程度非常低的实验室检测方法。提高ANA检测的标准化程度仍然是目标。

研究显示，罕见ANAs模式（各见于＜1%的患者）与自身免疫性风湿病之间没有强烈相关性；多种核点型和核被膜模式（高滴度）对于自身免疫性肝病具有一定特异性；并且研究结果表明增殖细胞核抗原（PCNA）与系统性红斑狼疮（SLE）之间并无密切相关性。

讲者认为，通常应通过病史、体检和常规实验室检查来诊断自身免疫性风湿病。检查肝功能和甲状腺功能，可能的话检查甲状腺自身抗体。进行与年龄适当的癌症筛查。罕见ANA模式不是很有助于确诊自身免疫性风湿病，因此临床上缺乏进行IFA ANA检测的理由。

滴度对于临床解读IFA ANA至关重要。不同实验室之间（甚至在同一个实验室内部）的IFA标准化程度非常低，这个问题可通过‘终点’控制来解决。

‘阳性ANA’有多常会被报告为阴性？近期的美国调查显示，通常预期的结果是1:160。2.6%的实验室会将结果报告为阴性，这与实验室的专业熟练水平相关。以EIA作为ANA筛查方法的话，6.5%的结果被报告为阴性；使用IFA ANA筛查法的情况下，1.5%的结果被报告为阴性；使用多重微珠检测法的情况下，2.0%的结果被报告为阴性。

那么如何处理实验室ANA检测方面的变异性呢？我们需要知道的是不同的实验室有不同的特点，所以需要‘了解你的实验室’。对于那些不支持你的临床判断的检测，可重复进行检测。如果存在疑问或问题，可反馈给实验室主任，如果实验室未使用终点控制的话，可建议这么做。通过ACR与美国病理医师学会（CAP）之间的专业互动来改进和协调。

在ANA阳性的情况下，可能并不存在风湿病。自身免疫性甲状腺和肝脏疾病等一些自身免疫性疾病可存在ANA阳性的情况。

研究显示，自身抗体在临床发生系统性红斑狼疮（SLE）之间就出现，甚至在诊断Sjögrens综合征18年前就存在ANA。ANA自身抗体与风湿病无关。致密细斑点型（ DFS）抗体与自身免疫性风湿病的低患病率相关。仅含有DFS70抗体的血清可帮助识别那些ANA IF检测阳性但无风湿病的患者。有研究者在1/3的健康ANA阳性个体中观察到DFS ANA模式。另外，健康个体中存在抗DFS70/LEDGF抗体的比例高于系统性自身免疫性风湿病患者。但是目前没有多少个实验室常规报告DFS，建议有能力的实验室应对此进行报告。目前已发表了首份有关抗核抗体HEp-2细胞模式的标准化术语的国际共识声明。DFS模式较难识别，在94份通过IFA观察到DFS模式的血清中，仅14%被抗DFS70 ELISA证实。然而，检测DFS70抗体的重要意义在于：该抗体与阳性ANA相关，与常见自身免疫性风湿病（SLE、Sjögrens综合征、SSc等）的发生无关。并且该抗体相对常见于一般人群，是一般人群阳性ANA的常见原因。该抗体的存在可通过ELISA证实。该抗体可能还有其他临床相关性，不过目前尚未明确。

研究显示，仅少数自身免疫性风湿病患者存在抗DFS70抗体。在自身免疫性风湿病中，抗DFS70抗体没有保护作用。DFS70可解释无风湿病人群中1/3的阳性ANA。讲者认为，由于IFA的结果较难解读，应通过特异性检测（ELISA、CIA、blot）来证实抗DFS70抗体。如果ANA IFA观察到DFS，ANA特异性检测（如多重微珠检测）均为阴性，则进行ELISA检测抗DFS70/LEGF，如果结果为阳性，则不需要转诊风湿病科，如果结果为阴性，则需转诊风湿病科。

ANA在SLE患者中的敏感性为96.5%，特异性为45.2%。在SLE患者中，ANA IFA检测法的敏感性高于ANA微珠检测法。在微珠检测中，最常见的抗体是抗染色质抗体，该抗体也最常见于一级家庭成员和不相关的正常个体。微珠检测的抗染色质抗体的临床意义目前仍不清楚。SLE患者中进行的ANA检测法在美国和全球都还是标准化程度不高的方法。应仍将IFA ANA纳入考虑选择的筛查方法中，但我们应致力于改善检测的精度/重现性。IFA检测的ANA模式和多重微珠系统检测的抗体的特异性都不如我们预期的高。单个时间点进行的检测对SLE的特异性并不如在多个时间点进行的检测。